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如何避免樣本損失?低吸附離心管的核心使用要點
第一部分:如何避免樣本損失
樣本損失通常由兩個因素導(dǎo)致:物理吸附 和 化學(xué)降解。低吸附管主要解決前者,但綜合策略才能達到最佳效果。
選擇正確的耗材(治本之策):
使用低吸附離心管/吸頭:這是最直接有效的方法。它們經(jīng)過特殊處理,能顯著減少生物大分子的非特異性吸附。
注意材質(zhì):聚丙烯(PP)是標(biāo)準(zhǔn)材質(zhì),但表面仍有疏水性。低吸附管通常通過物理或化學(xué)修飾使管壁更親水、更光滑。
優(yōu)化實驗操作:
預(yù)先潤洗:即使使用低吸附管,對于極其珍貴或低濃度的樣本,用與樣本緩沖液相似的溶液快速潤洗一下管壁和吸頭,可以飽和潛在的吸附位點。注意:對于蛋白樣本,常用0.1% BSA溶液潤洗,但需確認(rèn)BSA不會干擾后續(xù)實驗。
減少轉(zhuǎn)移步驟:每一步液體轉(zhuǎn)移都會帶來損失。盡量減少樣本在不同容器間的轉(zhuǎn)移次數(shù),整合實驗步驟。
精準(zhǔn)操作:使用量程合適的移液器和吸頭,確保吸打和排液,避免液體殘留。對于微量樣本,可采用反向移液法以提高精度。
注意樣本特性與保存:
分裝保存:避免反復(fù)凍融。將樣本分裝成小份,每次只取用一份,最大限度減少降解和管壁吸附的總機會。
添加保護劑:根據(jù)樣本類型添加合適的保護劑。例如,在核酸樣本中加入EDTA抑制核酸酶,在蛋白樣本中加入蛋白酶抑制劑 cocktail。
使用合適的緩沖液:含有少量去垢劑或載體蛋白的緩沖液可以競爭性地結(jié)合管壁,減少目標(biāo)分子的吸附。同樣,需確認(rèn)這些添加劑不影響后續(xù)實驗。
第二部分:低吸附離心管的核心使用要點
低吸附管是工具,正確使用才能發(fā)揮其最大價值。
認(rèn)清標(biāo)識,選擇正品:
認(rèn)準(zhǔn)包裝和管身上的 “Low-Bind"、“Non-Stick" 等標(biāo)識。
選擇信譽良好的品牌供應(yīng)商,避免使用偽劣產(chǎn)品。劣質(zhì)管可能不僅無效,還會引入雜質(zhì)(如RNase)。
區(qū)分應(yīng)用,按需選擇:
核酸應(yīng)用:尤其是微量DNA、PCR產(chǎn)物、小片段核酸或珍貴文庫,應(yīng)使用低吸附管。它們能有效防止核酸吸附,保證濃度和產(chǎn)量的準(zhǔn)確性。
蛋白應(yīng)用:對低濃度蛋白、酶、抗體、多肽等至關(guān)重要。吸附會導(dǎo)致活性喪失、定量不準(zhǔn)和信號減弱。
常規(guī)應(yīng)用:對于細(xì)菌培養(yǎng)、大量樣本儲存、離心沉淀等操作,標(biāo)準(zhǔn)離心管已足夠,無需浪費低吸附管。
正確標(biāo)記:
低吸附管的表面通常也更疏水,普通記號筆可能難以書寫或容易脫落。
建議使用專用的實驗室標(biāo)記筆或打印的標(biāo)簽。
存儲注意:
按照說明書要求,存放在干燥、避光、常溫的環(huán)境中。避免溫度或濕度影響其性能。
遵循以上要點,您可以最大限度地減少實驗過程中的樣本損失,確保實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性。
注:以上僅供參考,不作為實際數(shù)據(jù),實驗需嚴(yán)格遵循說明或咨詢技術(shù)老師。
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