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　　以下是本生技術小編對ELISA試劑盒實驗操作的規(guī)范詳解，結合雙抗體夾心法的通用流程及注意事項：

　　一、實驗前準備?

　　試劑平衡?

　　試劑盒從冰箱取出后，需室溫平衡20-30分鐘(避免溫度差異影響反應)?。

　　設備校準?

　　移液器需定期校準，選擇密封性好的槍頭，避免加樣誤差(誤差可超5%)?。

　　二、加樣規(guī)范?

　　標準品與樣本處理?

　　標準品需按說明書渦旋溶解，靜置10-30分鐘至溶解，避免吹打導致蛋白損失?。

　　樣本需離心(2000×g，15分鐘)去除顆粒物，血清/血漿避免溶血或脂血干擾?。

　　加樣操作?

　　垂直懸空加液，避免貼壁或產生氣泡，每孔加樣量需一致(如50μL標準品或樣本)?。

　　建議設置復孔(至少2孔/樣本)，提高數(shù)據(jù)可靠性?。

　　三、孵育與洗滌?

　　孵育條件?

　　37℃恒溫箱孵育60分鐘(雙抗體夾心法)，封板膜密封防止蒸發(fā)?。

　　震蕩孵育可增強抗原抗體結合效率(OD值更高)?。

　　洗滌步驟?

　　手工洗板：每孔加滿洗滌液(350μL)，靜置1分鐘后拍干，重復5次?。

　　機器洗板：檢查沖洗頭是否堵塞，確保洗滌凈。

　　四、顯色與檢測?

　　底物反應?

　　加入TMB底物后避光孵育15分鐘，顯色呈藍色?。

　　終止液加入后5分鐘內測定OD值(450nm)，避免延遲導致信號衰減?。

　　數(shù)據(jù)計算?

　　標準曲線需線性良好(R2≥0.99)，樣本濃度通過曲線方程計算?。

　　五、常見問題與解決?

　　問題? ?可能原因? ?解決方案?

　　空白孔OD值過高 洗滌不凈或試劑污染 更換新鮮洗滌液，重復洗板?

　　平行孔CV值>10% 加樣誤差或孵育溫度波動 校準移液器，使用恒溫箱?

　　顯色不均勻 底物混合不充分 顯色前充分搖勻試劑?

　　六、關鍵注意事項?

　　試劑保存?：未用完板條需密封干燥保存，濃縮洗滌液結晶需37℃水浴溶解?。

　　樣本稀釋?：若說明書要求稀釋樣本(如5倍)，最終結果需乘以稀釋倍數(shù)?。

　　以上規(guī)范適用于多數(shù)ELISA試劑盒，具體操作需以試劑盒說明書為準。實驗失敗時建議優(yōu)先檢查加樣精度和洗滌步驟?。

　　注：以上資料僅供參考，具體其他信息請咨詢技術老師或品牌供應商。

　　Elisa試劑盒 本生一直視質量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營中始終秉承：遵紀守法，嚴于律己，寬仁以待，敢于承擔的企業(yè)精神作為標準，以過硬的質量和優(yōu)良的服務來維護和拓展市場，較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏，是我們的發(fā)展目標。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作，共創(chuàng)美好的未來。