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本生詳解抗體的制備方法與原理
更新時間:2021-01-04瀏覽:1323次

  本生詳解抗體的制備方法與原理

  抗血清的制備

  有了質(zhì)量好的抗原,還必須選擇適當?shù)拿庖咄緩?,才能產(chǎn)生質(zhì)量好(特異性強和效價高)的抗體。

  ()用于免疫的動物

  作免疫用的動物有哺乳類和禽類,主要為羊、馬、家兔、猴、豬、豚鼠、雞等,實驗室常用者為家兔、山羊和豚鼠等。動物種類的選擇主要根據(jù)抗原的生物學特性和所要獲得抗血清數(shù)量,如般制備抗r-免疫球蛋白抗血清,多用家兔和山羊,因動物反應(yīng)良好,而且能夠提供足夠數(shù)量的血清,用于免疫的動物應(yīng)適齡,健壯,無感染性疾患,-好為雄性,此外還需十分注意動物的飼養(yǎng),以消除動物的個體差異以及在免疫過程中死亡的影響。若用兔,-好用純種新西蘭兔,組三只,兔的體重以2~3kg為宜。

  (二)免疫途徑

  免疫途徑有多種多樣,如靜脈內(nèi)、腹腔內(nèi)、肌肉內(nèi)、皮內(nèi)、皮下、淋巴結(jié)內(nèi)注射等,般常用皮下或背部多點皮內(nèi)注射,每點注射0.1ml左右。途徑的選擇決定于抗原的生物學特性和理化特性,如激素、酶、毒素等生物學活性抗原,般不宜采用靜脈注射。

  (三)佐劑

  由于不同個體對同抗原的反應(yīng)性不同,而且不同抗原產(chǎn)生免疫反應(yīng)的能力也有強有弱,因此常常在注射抗原的同時,加入能增強抗原的抗原性物質(zhì),以刺激機體產(chǎn)生較強的免疫反應(yīng),這種物質(zhì)稱為免疫佐劑。

  佐劑除了延長抗原在體內(nèi)的存留時間,增加抗原刺激作用外,更主要的是,它能刺激網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng),使參與免疫反應(yīng)的免疫活性細胞增多,促進T細胞與B細胞的相互作用,從而增強機體對抗原的細胞免疫和抗體的產(chǎn)生。

  常用的佐劑是福氏佐劑(Freund adjuvant),其成分通常是羊毛脂1份、石臘油5份,羊毛脂與石臘油的比例,視需要可調(diào)整為1:2~9(V/V),這是不*福氏佐劑,在每毫升不*佐劑加入1~20mg卡介苗就成為*佐劑。

  配制方法:按比例將羊毛脂與石蠟油置容器內(nèi),用超聲波使之混勻,高壓滅菌,置4℃下保存?zhèn)溆?。免疫取等容積*或不*佐劑與免疫原溶液混合,用振蕩器混勻成乳狀,也可以在免疫取需要量佐劑置乳缽中研磨,均勻后再邊磨邊滴加入等容積抗原液(其中加卡介苗3~4mg/ml或不加),加完后再繼續(xù)研磨成乳劑,滴于冰水上5~10min內(nèi)*不擴散為止。為避免損失抗原,亦可用注射器裝抗原液,另注射器裝佐劑,二者以聚乙烯塑料管連接,然后二者來回反復(fù)抽吸,約數(shù)十分鐘后即能*乳化。檢查合格后即以其中注射器作注射用。

  (四)免疫方法

  抗原劑量,次劑量為300~500μg,加強免疫的劑量約為次劑量為1/4左右。每2~3周加強免疫次。加強免疫時用不*佐劑,次免疫時皮下注射百日咳疫苗0.5ml,加強免疫時不必注射百日咳疫苗。

  在第2次加強免疫后2周,從耳緣靜脈取2~3ml血,制備血清,檢測抗體效價(見后)。如未達到預(yù)期效價,需再進行加強免疫,直到滿意時為止(圖2-3)。當抗體效價達到預(yù)期水平時,即可放血制備抗血清。

  抗體的制備方法與原理先和大家介紹到這,如果想要了解更多抗體的信息,可以關(guān)注天津本生生物,本生業(yè)給生物醫(yī)藥客戶提供生物實驗室檢測耗材,試劑,歡迎廣大客戶來詢。

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